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TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(BIOTIN标记POD法)图片
产品货号:
KFS502
中文名称:
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(BIOTIN标记POD法)
英文名称:
产品规格:
20T|50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是生物素标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3'-OH末端,并可与Streptavidin-HRP特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片或爬片)的凋亡原位检测。




组分20T50T100T保存
包装一10×Proteinase K200μL500μL1000μL -20℃
DNase I(50U/μL)200μL500μL1.0mL
DNase I Buffer200μL500μL1.0mL
Equilibration Buffer1.0mL2.5mL5.0mL
TdT Enzyme80μL200μL400μL
Biotin-11-dUTP20μL50μL100μL
包装二DAB-A Solution150μL300μL600μL 2~8℃
DAB-B Solution150μL300μL600μL
DAB-C Solution150μL300μL600μL 2~8℃,避光
Streptavidin-HRP10μL25μL50μL

保存:包装一置于-20℃,包装二置于2~8℃,有效期1年。


多聚甲醛、二甲苯、乙醇、1×PBS pH7.4、H2O2、Triton X-100、甲醇、苏木素染液、多聚赖氨酸铺载玻片(细胞样本)、盖玻片、染色缸、温盒、量筒等。


  1. 各个样本请用免疫组化笔做好标记,另外加2张样本切片分别用于阳性片和阴性片制备并做好标记。
  2. 在每步反应或浸洗的间隙时,配制下一步即用的工作液。
  3. 反应液最好根椐计算好的样本数量集中配制,再分别滴加于各样本上,避免因每个样本单独配制而产生的试剂损耗,TdT酶反应液如需短暂保存时,请置于冰上。
  4. 配制好的DAB工作液应为浅棕色,如颜色过深,请勿使用。
  5. 操作请戴手套,防止试剂沾染皮肤,如有沾染请立即用大量清水冲洗。
  6. 对于样本组织是特殊组织,如:脑、心脏等,推荐使用高敏型一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(KFS503)。



  1. 固定或前处理
    1. 细胞涂片或冷冻切片
      1. 将自然晾干的细胞样本(细胞涂片或爬片)或冷冻切片浸入盛有4%多聚甲醛固定液的染色缸,室温(15~25℃)固定20~30min;
      2. 样本片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
    2. 石蜡切片
      1. 切片按常规方法进行脱蜡,60℃烘片60min后,二甲苯脱蜡2次,乙醇水合(100%、95%、80%、75%)每次5min;
      2. 切片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
  2. 通透
    1. 细胞涂片或冷冻切片
      1. 配制1%Triton X-100通透液;例:99mL的1×PBS加入1.0mL Triton X-100,混匀,即用即配;
      2. 样本片浸入通透液中,室温促渗3~5min;之后浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
    2. 石蜡切片
      1. 配制Proteinase K工作液:计算好样本数量集中配制,每样本90μL 1×PBS加入10μL 10×ProteinaseK,即用即配;
      2. 每个组织切片上滴加100μL Proteinase K工作液,37℃反应30min。切片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
        注意:对于部分固定过久的样本可选用微波方法,将切片置于pH6.0柠檬酸盐缓冲液中,微波中高火8min后,取出晾凉。
  3. 封闭
    1. 配制3% H2O2封闭液;例:80mL甲醇加入10mL H2O和10mL H2O2(30%),即用即配;
    2. 样本片浸入封闭液中,室温(15~25℃)封闭10min;
    3. 样本片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
  4. 制阳性片
    1. 根据样本类型不同,配制100μL含不同活性单位U的DNaseⅠ反应液,方法如下:
      样本细胞样本冷冻切片石蜡切片
      U/100μL1000U~2000U2000U~3000U3000U~5000U
      DNase I(50U/μl)用量20μL~40μL40μL~60μL60μL~100μL
      DNase I Buffer用量80μL~60μL60μL~40μL40μL~0μL

      注:阳性片只针对实验体系进行设置对照,不需要每片制备。
    2. 在一张样本上滴加100μL上述配制好的DNaseⅠ反应液,室温~37℃处理10~30min,
    3. 上述阳性片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
  5. 连接
    1. 配制TdT酶反应液:计算好样本数量集中配制(阴性对照片不计入),每个样本用量为:在45μL Equilibration Buffer加入1.0μL Biotin-11-dUTP和4.0μL TdT Enzyme,即用即配;
    2. 样本周围用吸水纸吸干,每个样本上滴加50μL TdT酶反应液,加盖玻片放入温盒中,37℃避光反应60min;
      注:阴性对照样本不加TdT酶反应液。
    3. 反应后的样本片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
  6. 标记
    1. 配制Streptavidin-HRP工作液,计算好样本数量集中配制,每个样本用量为:49.5μL 1×PBS加入0.5μL Streptavidin-HRP,即用即配,注意避光;
    2. 样本周围用吸水纸吸干,每个样本上滴加50μL Streptavidin-HRP工作液,加盖玻片放入温盒中,37℃避光反应30min;
    3. 反应后的样本片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min;
  7. 显色
    1. 配制DAB工作液:计算好样本数量集中配制,每个样本样本用量为:50μL dH2O加入2.5μL DAB-A Solution,混匀后再加入2.5μL DAB-B Solution和2.5μL DAB-C Solution,即用即配;
    2. 样本周围用吸水纸吸干,每个样本上滴加50μL DAB工作液,室温显色反应30s~5min;
    3. 显色后的样本片浸入1×PBS漂洗三次,每次5min。
  8. 复染
    1. 苏木素、甲基绿等常规染液复染(自备试剂):将样本上滴加苏木素染液,染色30s~5min(请在显微镜下观察确定),蒸馏水冲洗干净后浸入1%盐酸甲醇溶液中分化5s,立即用蒸馏水冲洗干净。分别用70%、85%、95%、无水乙醇浸洗5min,用二甲苯浸二次,每次10min(细胞爬片或涂片可不经过梯度乙醇和二甲苯浸润)。晾干后在切片上加中性树胶,加盖玻片,光学显微镜下观察拍照。



组织样本准备方法
  1. 石蜡样本:动物经4%多聚甲醛全身灌注后及时取材,样本转移至15、50mL密闭离心管中,4%多聚甲醛固定(组织必须完全浸没在固定液中),室温存放24h以上,可长期保存,常温密封运输,封口膜封好,组织块不易过大过厚,一般2cm×1.5cm×0.3cm,尤其是组织块厚度须保持在0.3cm以内(固定液现配使用)。
  2. 冰冻样本:动物经4%多聚甲醛全身灌注后及时取材,4%多聚甲醛固定24h,30%蔗糖脱水48h以上,-20℃或-80℃冷冻(特殊组织特殊处理:如脑组织,需灌注后取材;眼球需用特殊固定液)。

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